HEMATOKSILIN PEWARNA DALAM STUDI HISTOPATOLOGI

Hematoksilin, Natural Black 1, atau C.I. 75290 diekstrak dari batang pohon kayu logwood. Ketika dioksidasi hematoksilin membentuk hematein, suatu senyawa yang membentuk kompleks berwarna sangat kuat dengan ion logam tertentu, yang paling menonjol adalah garam Fe(III) dan Al(III). Kompleks logam-haematein digunakan untuk mewarnai inti sel sebelum diperiksa di bawah mikroskop. Struktur yang berwarna dengan besi-atau aluminium-hematein sering disebut basophilik, meskipun mekanisme pewarnaan yang berbeda dari pewarnaan dengan pewarna dasar.

Pewarna hematoksilin dan eosin merupakan salah satu dari pewarna yang digunakan paling umum dalam histologi. Ini adalah pewarna permanen yang berlawanan dengan pewarna sesaat (misalnya larutan iodium dalam KI).

Pewarna umum lain ialah Hematoksilin asam fosfotungstat, suatu campuran dari hematoksilin dengan asam fosfotungstat.

Di awal tahun 1970-an dan pada 2008,  kekurangan hematoksilin karena ada gangguan dalam ekstraksi dari kayu bulat (logwood). Harga senyawa ini meningkat, mempengaruhi biaya histopatologi diagnostik, dan diminta mencari alternatif untuk pewarna inti.

Sebelum penggunaan setiap alternatif menjadi mapan, hematoksilin kembali ke pasar, meskipun dengan harga yang lebih tinggi, dan kembali tempatnya di histopatologi. Beberapa pewarna sintetik telah direkomendasikan sebagai pengganti, terutama Celestine biru (CI 51050), gallocyanine (CI 51030), Gallein (CI 45445) dan Eriochrome cyanine R (juga disebut chromoxane cyanine R dan solochrome cyanine (CI 43820). Keempatnya memiliki Fe (III) sebagai mordan. alternatif lain adalah kompleks aluminium brazilin teroksidasi, yang berbeda dari hematoksilin hanya dengan satu gugus hidroksil.

Nama IUPAC-nya 7,11b-Dihidroindeno[2,1-c]kromena-3,4,6a,9,10(6H)-pentol, sedangkan nama lainnya Haematoksilin; Natural Black 1; Hematoksilin; Hidroksibrazilin; Hidroksibrasilin; dan C.I. 75290. Hematoksilin memiliki rumus C16H14O6, dengan berat molekul 302,28 g mol−1.

Larutan Pewarna

Pewarna ini digunakan secara umum untuk studi hidtopatologi. Mordan ini digunakan untuk menunjukkan inti dan struktur sitoplasma adalah alum dan besi, yang membentuk danau atau kompleks berwarna (kompleks jaringan-mordan-pewarna), warna yang akan tergantung pada garam yang digunakan. Danau garam Aluminium biasanya berwarna biru-putih, sedangkan danau garam besi berwarna biru-hitam.

Larutan Aluminium

Tiga larutan alum hematoksilin utama yang digunakan adalah hematoksilin Ehrlich, hematoksilin Harris, dan hematoksilin Mayer. Nama hemalum lebih disukai untuk “hematoksilin” untuk larutan ini karena haematein, suatu produk oksidasi dari hematoksilin, ialah senyawa yang bergabung dengan ion aluminium untuk membentuk kompleks logam-zat warna aktif. Larutan Alum hematoksilin memberikan kepada inti sel dengan warna merah terang yang transparan yang cepat berubah menjadi biru setiap terkena cairan netral atau basa.

Alum atau kalium aluminium sulfat yang digunakan sebagai mordan biasanya terurai dalam larutan alkali, penyatuan dengan  HO dari air untuk membentuk aluminium hidroksida yang tidak larut. Dengan adanya sisa asam, aluminium hidroksida tidak dapat terbentuk, dengan demikian menyebabkan kegagalan terbentuk danau-zat warna hematoksilin, karena kekurangan ion OH. Karena, larutan asam dari alum hematoksilin menjadi merah. Selama pewarnaan, bagian alum hematoksilin-ternoda biasanya dilewatkan pada larutan alkali (misalnya, air leding sadah atau ammonium hidroksida 1%) dalam upaya untuk menetralkan asam dan membentuk kompleks aluminium hematein tidak larut. Prosedur ini dikenal sebagai pembiruan.

Ketika air keran tidak cukup basa, atau bahkan asam dan tidak memuaskan untuk membirukan hematoksilin, pengganti air keran yang terdiri dari 3,5 gr NaHCO3 dan 20 gr MgSO4.7H2O dalam satu liter air dengan timol (untuk menghambat pembentukan jamur), digunakan untuk mempercepat membirukan bagian parafin tipis.

Penambahan alkali apa pun dalam jumlah sangat sedikit ke dalam air keran atau air suling juga memberikan larutan membiru yang efektif; beberapa tetes ammonium hidroksida kuat atau litium karbonat encer jenuh, ditambahkan segera sebelum digunakan, cukup untuk 400 ml pewarnaan sepiring penuh air. Penggunaan air yang sangat dingin memperlambat proses membirukan, sedangkan pemanasan mempercepat pembiruan. Bahkan, penggunaan air di bawah 10 °C untuk membirukan bagian bahkan dapat menyebabkan kehilangan warna artefak merah muda dalam jaringan.***

Leave a Reply

Fill in your details below or click an icon to log in:

WordPress.com Logo

You are commenting using your WordPress.com account. Log Out / Change )

Twitter picture

You are commenting using your Twitter account. Log Out / Change )

Facebook photo

You are commenting using your Facebook account. Log Out / Change )

Google+ photo

You are commenting using your Google+ account. Log Out / Change )

Connecting to %s